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毛细管电泳仪进样技术要达到标准需要满足的条件

更新时间:2018-11-24点击次数:126次
毛细管电泳仪进样技术要达到标准需要满足的条件
   毛细管电泳仪进样技术要达到标准需要满足的条件
  
  毛细管电泳仪工作原理
  
  毛细管电泳仪采用并行毛细管电泳(CE)与荧光检测技术相结合,能够对DNA和RNA电泳分离检测。毛细管列阵是并行毛细管电泳的基础,根据毛细管列阵的毛细管数量分为96和12通道,每个毛细管首先注入可导电的分离胶,然后对毛细管两端施加电场,96孔板中的预检测样品开始毛细管电泳。依据核酸片段长度不同在凝胶电泳中迁移速度不同的原理核酸样品被分离检测。
  
  毛细管电泳仪分析对进样技术要求很高,进样操作事项如下:
  
  一、进样区带越小越好:
  
  无论采用何种进样方式,毛细管插入样品溶液的深度一般要少于毛细管总长度的1%~2%,以尽量减少样品溶液经毛细吸附进入毛细管而影响进样量的性。样品管中溶液少为5μL,进样体积为1~50nL。
  
  二、进样时间以短为宜:
  
  通常进样时间为0.5~1s,此时毛细管粘附的样品量相对于吸入的体积可忽略不计。
  
  虽然毛细管电泳的进样时间可至±0.1s,但由于毛细管插入样品管时不可避免地会粘附一些溶液,进样时间过短会影响分析的重复性。
  
  三、样品预浓缩:
  
  受毛细管电泳仪毛细管内总体积的制约,对于浓度很稀的样品,毛细管电泳不能象HPLC那样可加大进样量来提高检测灵敏度,但可采取一些措施来改善。
  
  1、当样品缓冲液的电导明显低于(100倍以上)电泳缓冲液时,毛细管两端加上电压后可在样品区带前后形成一个更大的电场,使样品溶液中的分子迁移的更快。当这些分子到达电泳缓冲液边界时,由于电场减弱,迁移速度减慢,使样品区带由宽变窄,浓度提高,而达到浓缩的目的。
  
  2、当样品缓冲液和电极缓冲液的电导一样,而样品浓度较稀,不适合再作稀释时,可在进样前先吸入一些水,也能达到浓缩的目的。
  
  无论采取何种进样方式,上述方法都可使样品堆积浓缩。但由于在堆积区带电势陡降,会导致此区带温度升高。
  
  四、毛细管插入样品溶液后,应立即开始进样操作,完成后迅速移至缓冲液中开始电泳。否则会产生毛细作用和虹吸现象,引起误差并使谱带展宽。
  
  五、电极不要和毛细管接触,样品贮器和缓冲液贮器液面的高度应保持平衡。
  
  六、使系统尽可能保持恒温。因温度直接影响粘度,而影响进样量的恒定。
  
  七、样品溶液中的溶剂必须与缓冲液互溶,前者的离子强度应低于后者。
  
  八、防止样品溶液和缓冲液蒸发、损耗。
  
  
重庆尚立仪器设备有限公司(www.uzumakionline.com)主营产品:毛细管电泳仪,超微量分光光度计,气相色谱-质谱联用仪,全自动核酸提取仪,重庆荧光显微镜
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